Amiloidose nodular - relato de rara apresentação da amiloidose localizada cutânea / Nodular amyloidosis - report of a rare presentation of cutaneous localized amyloidosis

Contexto: Amiloidose é um grupo de doenças caracterizadas pelo depósito de proteínas fibrilares, denominadas substância amiloide. Podem ser divididas em formas localizadas ou sistêmicas, sendo que dentre as localizadas, a forma nodular é a mais rara. Descrição do caso: Relatamos o caso de amiloidose primária localizada cutânea nodular que se apresentou com nódulos violáceos no dorso, e placas acastanhadas na região cervical há 8 anos sem evidências de envolvimento sistêmico. Discussão: Como cerca de 1% a 7% dos casos de amiloidose nodular localizada cutânea podem evoluir com envolvimento sistêmico, o seguimento dos pacientes faz-se necessário. O tratamento não é obrigatório, a retirada das lesões pode ser feita se o paciente o desejar, contudo as recidivas são frequentes. Conclusões: Mesmo possuindo baixa prevalência, a amiloidose nodular deve ser reconhecida pelo risco de progredir para acometimento sistêmico e associação com discrasias plasmocitárias, como mieloma múltiplo.

Análise da atividade fosfolipásica do veneno de serpentes do gênero Bothrops: um estudo comparativo

Snake envenomation was reintroduced as a neglected tropical disease by the World Health Organization (WHO) in 2017 and represents a serious public health problem for tropical and subtropical regions of developing countries. Species of the genus Bothrops are considered Category 1 of medical importance by the WHO, accounting for approximately 85% of snakebites that occur throughout the year in Brazil. Variations in the venom composition of snakes of the same species can be determined according to genetics, diet, gender, geographicaldistribution, age or even seasonality. The objective is to investigate the phospholipase activity comparatively in adult snakes of the species: Bothrops alternatus, Bothrops atrox, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops leucurus, Bothrops moojeni, Bothrops neuwiedi and Bothrops pauloensis, as well as the identification of variations in the enzymatic activity of L - amino acid oxidase and immunoenzymatic variations of the toxins present in these venoms. Methods of characterization of biochemical activity and immunorecognition were used: proteindosage by the Bradford method; SDS- containing polyacrylamide gel electrophoresis; High Performance Liquid Chromatography – Reverse Phase; phospholipase activity with NOBA substrate; L-amino acid oxidase activity on L-methionine and Western Blotting. The results show interspecific and intraspecific differences. In the electrophoresis gel it was possible to observe differences involving absence, presence and intensity of bands. PLA2 and LAAO activities were notably higher in males although Balt1 and Bju1 were exceptions, with their phospholipase activity lower than that of females (Balt2 and Bju2). The commercial Bothrops antivenom produced by the Butantan Institute presents a good pattern of band recognition forming a profile similar to the gels, regardless of gender and only in the regions between 37 and 25 kDa there was a lack of recognition in bands. Although all the chromatograms presenteda very similar profile, it is noticeable that there was a notable gain in variability, some quantitative differences were observed in the chromatographic profiles of the venoms studied.

O envenenamento por serpentes foi reintroduzido como uma doença tropical negligenciada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) em 2017 e representa um grave problema de saúde pública para as regiões tropicais e subtropicais de países em desenvolvimento. As espécies do gênero Bothrops são consideradas Categoria 1 de importância médica pela OMS, responsáveispor aproximadamente 85% dos acidentes ofídicos que ocorrem ao longo do ano no Brasil. Variações na composição do veneno das serpentes de uma mesma espécie podem ser determinadas segundo a genética, a dieta, o gênero, a distribuição geográfica, a idade ou até mesmo a sazonalidade. Objetivando investigar a atividade fosfolipásica comparativamente em serpentes adultas das espécies: Bothrops alternatus, Bothrops atrox, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops leucurus, Bothrops moojeni, Bothrops neuwiedi e Bothrops pauloensis, assim como perfil da composição proteica e variações imunoenzimáticas das toxinas presentes nestes venenos, utilizaram-se os métodos de caracterização de atividade bioquímica e de imunorreconhecimento: dosagem de proteínas pelo método de Bradford; SDS- PAGE; cromatografia Líquida de Alta Performance – Fase Reversa; atividade fosfolipásica sobre NOBA; atividade de L-aminoácido oxidase sobre L- metionina e Western Blotting. Os resultados mostram diferenças interespecíficas e intraespecíficas. No gel de eletroforese foi possível observar diferenças envolvendo ausência, presença e intensidade de bandas. As atividades de PLA2 e LAAO foram notavelmente maiores em machos, apesar de B. alternatus e B. jararacussu terem sido exceções, com sua atividade fosfolipásica menor que a das fêmeas. O antiveneno botrópico comercial produzido pelo Instituto Butantan apresenta um bom padrãode reconhecimento de bandas formando um perfil semelhante aos géis, independente do gêneroe apenas nas regiões entre 37 e 25 kDa houve escassez de reconhecimento em bandas. Apesar de todos os cromatogramas terem apresentado um perfil bem semelhante, é perceptível, que houve um notável ganho de variabilidade foram observadas algumas diferenças quantitativas nos perfis cromatográficos dos venenos estudados.

Aplicação da eletroforese capilar - espectrometria de massas para identificação dos produtos de degradação do aripiprazol em medicamentos / Application of capillary electrophoresis - mass spectrometry to identify aripiprazole degradation products in drugs

Diretrizes internacionais e nacionais como a FDA (Food and Drug Administration), ICH (International Council for Harmonisation) e ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária) estabelecem a exigência de testes de estabilidade para entender melhor a qualidade de um medicamento. O estudo de estabilidade deve ser realizado usando métodos indicativos de estabilidade que possam qualificar e quantificar os insumos farmacêuticos do medicamento, bem como as impurezas e produtos de degradação nele contidos. O aripiprazol é um antipsicótico atípico de segunda geração aprovado para o tratamento de esquizofrenia, transtorno bipolar, depressão e transtornos do espectro do autismo. Os métodos oficiais descritos nas farmacopeias para avaliar o aripiprazol e suas impurezas utilizam a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) como técnica principal. Nesta pesquisa, objetivou-se desenvolver um método indicativo de estabilidade por eletroforese capilar de zona (CZE) para o aripiprazol na forma farmacêutica de comprimidos, e identificação dos produtos de degradação por espectrometria de massas. O estudo de degradação forçada e a optimização do método desenvolvido por CZE foram realizados utilizando o conceito de delineamento de experimentos (DoE). A separação do aripiprazol de seus produtos de degradação foi conseguida usando uma coluna capilar de sílica fundida (30,2 cm x 75 µm ID), eletrólito de formiato de amônio 6 mmol/L (pH 3) com 5% de metanol sob um potencial de 15 kV e detecção em 214 nm. A capacidade indicativa de estabilidade do método foi investigada pela análise do aripiprazol após ser submetido a condições de estresse ácido, alcalino, térmico, fotolítico e oxidativo, de acordo com as diretrizes ICH. A oxidação foi a principal via de degradação entre as condições de estresse avaliadas. O aripiprazol foi separado dos seus produtos de degradação oxidativa em tempo de corrida abaixo de 5 minutos. O método por CZE mostrou ser linear na faixa de 60 - 140 µg/mL, R2 = 0,9980, precisão calculada como desvio padrão relativo (DPR) menor que 2% e exatidão calculada como recuperação média de 100,93 ± 0,77%. Os resultados obtidos demonstram que o método por HPLC-RP em modo gradiente, separou o aripiprazol e seus produtos de degradação em um tempo de corrida de 30 minutos. Quatro produtos de degradação foram detectados pelo método LC-MS e o principal produto de degradação oxidativo foi identificado. O aripiprazol mostrou-se suscetível à oxidação no grupo piperazina, gerando principalmente o composto aripiprazol-1-N-óxido

International and national guidelines such as the FDA (Food and Drug Administration), ICH (International Council for Harmonization) and ANVISA (National Health Surveillance Agency) establish the requirement for stability tests to better understand quality of a medicine. The stability study must be carried out using stability indicating methods that can qualify and quantify the pharmaceutical ingredients of the drug, as well as the impurities and degradation products contained therein. Aripiprazole is a second-generation atypic antipsychotic drug approved for the treatment of schizophrenia, bipolar disorder, depression, and autism spectrum disorders. The official method described in the pharmacopoeias to evaluate aripiprazole and its impurities is high performance liquid chromatography (HPLC) as the main technique. In this research, the objective was to develop an indicative method of stability by capillary zone electrophoresis (CZE) for aripiprazole in the pharmaceutical form of tablets, and identification of degradation products by mass spectrometry. The forced degradation study and the optimization of the method developed by CZE were carried out using the concept of design of experiments (DoE). The separation of aripiprazole from its degradation products was achieved using a fused silica capillary column (30,2 cm x 75 µm ID), 6 mmol/L ammonium formate electrolyte (pH 3) with 5% methanol under a potential of 15 kV and detection at 214 nm. The indicative stability of the method was investigated by analyzing aripiprazole after being subjected to acid, alkali, thermal, photolytic and oxidative stress conditions, according to the ICH guidelines. Oxidation was the main degradation pathway among the stress conditions evaluated. Aripiprazole was separated from its oxidative degradation products at run times below 5 minutes. The CZE method proved to be linear in the range of 60 - 140 µg/mL, R2 = 0,9980, precision calculated as a relative standard deviation (DPR) of less than 2% and accuracy calculated as a mean recovery of 100,93 ± 0,77%. The results obtained demonstrate that the HPLC-RP method in gradient mode separated aripiprazole and its degradation products in a run time of 30 minutes. Four degradation products were detected by the LC-MS method and the main oxidative degradation product was identified. Aripiprazole was shown to be susceptible to oxidation in the piperazine group, generating mainly the compound aripiprazole-1-N-oxide

Characterization of proteinuria in treated and untreated dogs naturally infected with Leishmania sp / Caracterização da proteinúria de cães tratados e não tratados, naturalmente infectados com Leishmania sp

In the search for an early biomarker of renal injury, this study aimed to determine the urinary protein profile of dogs with leishmaniasis without treatment and treated as determined by Brazilian legislation. The identification of proteinuria, its classification and the circumstances in which it takes place instigated this study. For this, 30 dogs from an outpatient clinic at a Veterinary Hospital in Belo Horizonte were evaluated. All animals underwent clinical and laboratory tests, which included renal biomarkers. The proteins were characterized using the SDS-page electrophoresis technique, and thus, a urinary protein profile was developed comparing patients considered clinically healthy with dogs infected with leishmaniasis that were under treatment and with untreated infected dogs. The results showed that the hematological and biochemical parameters showed similar behavior between the groups of healthy dogs and dogs with leishmaniasis treated, however a very heterogeneous pattern of urinary proteins can be observed and differed between healthy animals and animals with leishmaniasis, as well as between treated and untreated animals. The results suggest that the classification of proteinuria can be a tool that helps in the staging of animals infected with L. infantum and can differentiate them as to the severity of existing kidney injuries.(AU)

Na busca por um biomarcador precoce de injúria renal, este trabalho teve como objetivo determinar o perfil proteico urinário de cães infectados com leishmaniose sem tratamento e tratados conforme determina a legislação brasileira. A identificação da proteinúria, sua classificação e as circunstâncias em que ocorrem instigaram este estudo. Para tanto, foram avaliados 30 cães oriundos do atendimento clínico ambulatorial de um Hospital Veterinário em Belo Horizonte. Todos os animais passaram por exame clínico e laboratorial, que incluíram biomarcadores renais. As proteínas foram caracterizadas através da técnica de eletroforese por SDS-PAGE, e assim, foi elaborado um perfil proteico urinário comparando pacientes considerados clinicamente hígidos, com cães infectados por Leishmania (L.) infantum e que estavam sob tratamento e cães infectados não tratados. Os resultados demonstraram que os parâmetros hematológicos e bioquímicos apresentaram comportamento semelhante entre os grupos de cães hígidos e de cães infectados com L. infantum tratados, entretanto um padrão muito heterogêneo de proteínas urinárias pode ser observado e diferiu entre animais hígidos e animais com leishmaniose, assim como entre os animais tratados e não tratados. Os resultados sugerem que a classificação da proteinúria pode ser uma ferramenta que auxilia no estadiamento de animais infectados por L. infantum podendo diferenciá-los quanto à gravidade de lesões renais existentes.(AU)

Effects of flunixin meglumine, meloxicam, and firocoxib on the acute-phase proteins in horses following standing castration

ABSTRACT: Excessive infection and inflammation are the most common complications associated with castration. The objective of this study was to compare the efficacy of flunixin meglumine (FM), meloxicam (MX), or firocoxib (FX) for inflammation control after castration in horses using acute-phase proteins (APP) as markers of inflammation. Thirty healthy, unbroken, mixed-breed horses (body weight 358.62±45.57kg and age 4.99±2.63 years) were randomly (n=10 animals/group) allocated to receive one of three different post-castration anti-inflammatory medicines: Group 1 (FM 1.1mg/kg bwt, IV, s.i.d for 5 days); Group 2 (MX 0.6mg/kg bwt, IV, s.i.d for 5 days); and Group 3 (FX 0.1mg/kg bwt, IV, s.i.d for 5 days). All horses were castrated in standing position, using the open technique. Serum and peritoneal APP concentrations were measured by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and determined before castration (0), and 3, 5, 24, 48, 72, 120 and 168 hours after castration. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (p 0.05). Three animals from the MX group developed hyperthermia (with rectal temperatures of 39.8, 39.3 and 38.9°C on day 4, 5 and 6, respectively) and showed local clinical signs of inflammation (inguinal and excessive scrotal edema) and reluctance to walk, as well as a rigid gait of the hind limbs. The same complications were observed in one FX horse. No complications were observed among the FM animals. The castration resulted in significant changes in serum and peritoneal values of total proteins, ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Alb), haptoglobin (Hp) and 1-acid glycoprotein (Gp) in animals of all experimental groups. However, the animals of the MX and FX groups presented more intense acute phase response compared to the animals of the FM group. Changes in the APP were associated with the surgical trauma of castration, but the differences between groups were associated with the ability of the nonsteroidal anti-inflammatory drug to control the inflammation. In conclusion, and based on the findings of acute phase proteins, flunixin is more efficient to control the magnitude of inflammation following castration as compared to meloxicam and firocoxib.

RESUMO: Infecção e inflamação excessivas são as complicações mais comuns associadas à castração. O objetivo deste estudo foi comparar a eficácia do flunixin meglumine (FM), meloxicam (MX) ou firocoxib (FX) no controle da inflamação após a castração em cavalos usando proteínas da fase aguda (APP) como marcadores de inflamação. Trinta equinos saudáveis (358,62±45,57kg; 4,99±2,63 anos) foram em função dos anti-inflamatórios utilizados após as castrações aleatoriamente (n= 10 animais/grupo) alocados em três diferentes grupos: Grupo 1 (FM 1,1mg/kg de peso, IV, sid por 5 dias); Grupo 2 (MX 0,6mg/kg de peso, IV, s.i.d por 5 dias); e Grupo 3 (FX 0,1mg/kg de peso, IV, s.i.d por 5 dias). Todos os cavalos foram castrados em posição quadrupedal, utilizando a técnica aberta. As concentrações de APP sérica e peritoneal foram separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) com dodecil-sulfato de sódio (SDS) e determinadas no momento 0 (antes da castração) e com 3, 5, 24, 48, 72, 120 e 168 horas após a castração. Os resultados foram submetidos à análise de variância pelo programa estatístico SAS e as médias foram comparadas pelo teste de Student-Newman-Keuls (p 0,05). Três animais do grupo MX desenvolveram hipertermia (com temperatura retal de 39,8, 39,3 e 38,9° C nos dias 4, 5 e 6, respectivamente) e mostraram sinais clínicos locais de inflamação (edema inguinal e escrotal excessivo) e relutância em andar, bem como marcha rígida dos membros posteriores. As mesmas complicações foram observadas em um cavalo do FX. Não foram observadas complicações entre os animais do FM. Independente do grupo, a castração resultou em alterações significativas nos valores séricos e peritoneais de proteínas totais, ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Alb), haptoglobina (Hp) e glicoproteína ácida 1 (Gp). No entanto, os animais dos grupos MX e FX apresentaram resposta de fase aguda mais intensa quando comparados aos animais do FM. Alterações na resposta de fase aguda deveram-se ao trauma cirúrgico da castração, mas as diferenças entre os grupos foram associadas à capacidade do anti-inflamatório em controlar a inflamação. Em conclusão, baseado da resposta de fase aguda, o flunixin em comparação com o meloxicam e o firocoxib é mais eficiente no controle da inflamação após a castração em equinos.

Characterization of proteinuria in treated and untreated dogs naturally infected with Leishmania sp

ABSTRACT: In the search for an early biomarker of renal injury, this study aimed to determine the urinary protein profile of dogs with leishmaniasis without treatment and treated as determined by Brazilian legislation. The identification of proteinuria, its classification and the circumstances in which it takes place instigated this study. For this, 30 dogs from an outpatient clinic at a Veterinary Hospital in Belo Horizonte were evaluated. All animals underwent clinical and laboratory tests, which included renal biomarkers. The proteins were characterized using the SDS-page electrophoresis technique, and thus, a urinary protein profile was developed comparing patients considered clinically healthy with dogs infected with leishmaniasis that were under treatment and with untreated infected dogs. The results showed that the hematological and biochemical parameters showed similar behavior between the groups of healthy dogs and dogs with leishmaniasis treated, however a very heterogeneous pattern of urinary proteins can be observed and differed between healthy animals and animals with leishmaniasis, as well as between treated and untreated animals. The results suggest that the classification of proteinuria can be a tool that helps in the staging of animals infected with L. infantum and can differentiate them as to the severity of existing kidney injuries.

RESUMO: Na busca por um biomarcador precoce de injúria renal, este trabalho teve como objetivo determinar o perfil proteico urinário de cães infectados com leishmaniose sem tratamento e tratados conforme determina a legislação brasileira. A identificação da proteinúria, sua classificação e as circunstâncias em que ocorrem instigaram este estudo. Para tanto, foram avaliados 30 cães oriundos do atendimento clínico ambulatorial de um Hospital Veterinário em Belo Horizonte. Todos os animais passaram por exame clínico e laboratorial, que incluíram biomarcadores renais. As proteínas foram caracterizadas através da técnica de eletroforese por SDS-PAGE, e assim, foi elaborado um perfil proteico urinário comparando pacientes considerados clinicamente hígidos, com cães infectados por Leishmania (L.) infantum e que estavam sob tratamento e cães infectados não tratados. Os resultados demonstraram que os parâmetros hematológicos e bioquímicos apresentaram comportamento semelhante entre os grupos de cães hígidos e de cães infectados com L. infantum tratados, entretanto um padrão muito heterogêneo de proteínas urinárias pode ser observado e diferiu entre animais hígidos e animais com leishmaniose, assim como entre os animais tratados e não tratados. Os resultados sugerem que a classificação da proteinúria pode ser uma ferramenta que auxilia no estadiamento de animais infectados por L. infantum podendo diferenciá-los quanto à gravidade de lesões renais existentes.

Occurrence of unusual haemoglobinopathies in balochistan: hb sd and hb se - presentation with osteomyelitis / Ocorrência de hemoglobinopatias incomuns no baluchistão: hb sd e hb se - apresentação com osteomielite

ABSTRACT Objective: To describe two cases of unusual variants of sickle cell disease. Case description: We present two cases of sickle cell disease variants (haemoglobinopathies), from unrelated families, in the state of Balochistan (Pakistan). One was diagnosed with sickle cell disease in the haemoglobin electrophoresis, whereas the other was diagnosed with sickle cell SE disease. Both were diagnosed based on the presentation of osteomyelitis. Comments: Haemoglobin SD disease (Hb SD) and haemoglobin SE disease (Hb SE) are rare haemoglobinopathies in the world. The lack of available literature suggests that both are variants of sickle cell disease (SCD), with heterogeneous nature. The prevalence of sickle cell disease with compound heterozygotes was found at a variable frequency in the population of the Asian Southeast. The frequency of osteomyelitis in SCD is 12 to 18%, but its occurrence among variant haemoglobinopathies is little reported. Both reported cases presented with osteomyelitis as a characteristic of the disease presentation.

RESUMO Objetivo: Descrever dois casos de variantes raras da hemoglobinopatia falciforme. Descrição do caso: Apresentamos aqui dois casos de hemoglobinopatias variantes das células falciformes, de famílias não relacionadas, no estado do Baluchistão (Paquistão), sendo um diagnosticado como doença da hemoglobina SD na eletroforese de hemoglobina, enquanto o outro com doença da hemoglobina SE. Ambos foram diagnosticados a partir da apresentação de osteomielite. Comentários: Hemoglobina SD (Hb SD) e hemoglobina SE (Hb SE) são hemoglobinopatias raras no mundo. A escassez de literatura disponível sugere que ambas são variantes da doença falciforme (DF) com natureza heterogênea. A prevalência de hemoglobinopatia falciforme com heterozigosidade composta foi encontrada com frequência variável na população do sudeste asiático. A frequência de osteomielite na DF é de 12 a 18%, mas sua ocorrência entre as hemoglobinopatias falciformes variantes é pouco relatada. Os dois casos reportados apresentaram osteomielite como característica de apresentação da doença.

Effects of flunixin meglumine, meloxicam, and firocoxib on the acute-phase proteins in horses following standing castration / Efeitos do flunixin meglumine, meloxicam e firocoxib na concentração de proteínas da fase aguda após em equinos após castração

Excessive infection and inflammation are the most common complications associated with castration. The objective of this study was to compare the efficacy of flunixin meglumine (FM), meloxicam (MX), or firocoxib (FX) for inflammation control after castration in horses using acute-phase proteins (APP) as markers of inflammation. Thirty healthy, unbroken, mixed-breed horses (body weight 358.62±45.57kg and age 4.99±2.63 years) were randomly (n=10 animals/group) allocated to receive one of three different post-castration anti-inflammatory medicines: Group 1 (FM 1.1mg/kg bwt, IV, s.i.d for 5 days); Group 2 (MX 0.6mg/kg bwt, IV, s.i.d for 5 days); and Group 3 (FX 0.1mg/kg bwt, IV, s.i.d for 5 days). All horses were castrated in standing position, using the open technique. Serum and peritoneal APP concentrations were measured by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and determined before castration (0), and 3, 5, 24, 48, 72, 120 and 168 hours after castration. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (p<0.05). Three animals from the MX group developed hyperthermia (with rectal temperatures of 39.8, 39.3 and 38.9°C on day 4, 5 and 6, respectively) and showed local clinical signs of inflammation (inguinal and excessive scrotal edema) and reluctance to walk, as well as a rigid gait of the hind limbs. The same complications were observed in one FX horse. No complications were observed among the FM animals. The castration resulted in significant changes in serum and peritoneal values of total proteins, ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Alb), haptoglobin (Hp) and α1-acid glycoprotein (Gp) in animals of all experimental groups. However, the animals of the MX and FX groups presented more intense acute phase response compared to the animals of the FM group. Changes in the APP were associated with the surgical trauma of castration, but the differences between groups were associated with the ability of the nonsteroidal anti-inflammatory drug to control the inflammation. In conclusion, and based on the findings of acute phase proteins, flunixin is more efficient to control the magnitude of inflammation following castration as compared to meloxicam and firocoxib.(AU)

Infecção e inflamação excessivas são as complicações mais comuns associadas à castração. O objetivo deste estudo foi comparar a eficácia do flunixin meglumine (FM), meloxicam (MX) ou firocoxib (FX) no controle da inflamação após a castração em cavalos usando proteínas da fase aguda (APP) como marcadores de inflamação. Trinta equinos saudáveis (358,62±45,57kg; 4,99±2,63 anos) foram em função dos anti-inflamatórios utilizados após as castrações aleatoriamente (n= 10 animais/grupo) alocados em três diferentes grupos: Grupo 1 (FM 1,1mg/kg de peso, IV, sid por 5 dias); Grupo 2 (MX 0,6mg/kg de peso, IV, s.i.d por 5 dias); e Grupo 3 (FX 0,1mg/kg de peso, IV, s.i.d por 5 dias). Todos os cavalos foram castrados em posição quadrupedal, utilizando a técnica aberta. As concentrações de APP sérica e peritoneal foram separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) com dodecil-sulfato de sódio (SDS) e determinadas no momento 0 (antes da castração) e com 3, 5, 24, 48, 72, 120 e 168 horas após a castração. Os resultados foram submetidos à análise de variância pelo programa estatístico SAS e as médias foram comparadas pelo teste de Student-Newman-Keuls (p<0,05). Três animais do grupo MX desenvolveram hipertermia (com temperatura retal de 39,8, 39,3 e 38,9° C nos dias 4, 5 e 6, respectivamente) e mostraram sinais clínicos locais de inflamação (edema inguinal e escrotal excessivo) e relutância em andar, bem como marcha rígida dos membros posteriores. As mesmas complicações foram observadas em um cavalo do FX. Não foram observadas complicações entre os animais do FM. Independente do grupo, a castração resultou em alterações significativas nos valores séricos e peritoneais de proteínas totais, ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Alb), haptoglobina (Hp) e glicoproteína ácida α1 (Gp). No entanto, os animais dos grupos MX e FX apresentaram resposta de fase aguda mais intensa quando comparados aos animais do FM. Alterações na resposta de fase aguda deveram-se ao trauma cirúrgico da castração, mas as diferenças entre os grupos foram associadas à capacidade do anti-inflamatório em controlar a inflamação. Em conclusão, baseado da resposta de fase aguda, o flunixin em comparação com o meloxicam e o firocoxib é mais eficiente no controle da inflamação após a castração em equinos.(AU)

Acute-phase protein concentration in bronchoalveolar lavage fluid from healthy horses / Proteínas de fase aguda do lavado broncoalveolar de equinos hígidos

Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was analyzed to obtain information on leakage of acute-phase proteins from the blood into the respiratory lumen and about local synthesis. Ceruloplasmin, transferrin, albumin, α1-antitripsin, immunoglobulin G heavy, immunoglobulin G light, immunoglobulin A, haptoglobin, acidic glycoprotein, and P23 were measured in BALF from 30 horses without inflammatory disease by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In serum, the same proteins were identified except for α1-antitrypsin. In conclusion, this study demonstrated that polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) can be used for the determination of acute-phase proteins in BALF samples from horses. In healthy horses, the values are very low, but they can be compared with reference values to assist in the diagnosis of animals with respiratory diseases.(AU)

O líquido obtido através da lavagem broncoalveolar (LBA) foi analisado para obter informações sobre as proteínas da fase aguda. Ceruloplasmina, transferrina, albumina, α1-antitripsina, imunoglobulina G pesada, imunoglobulina G leve, imunoglobulina A, haptoglobina, glicoproteína ácida e P23 foram medidas nos LBA de 30 cavalos sem doença inflamatória por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE). No soro, as mesmas proteínas foram identificadas, exceto a α1-antitripsina. Em conclusão, este estudo demonstra que a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) pode ser usada para a determinação de proteínas de fase aguda em amostras de LBA em cavalos. Em cavalos saudáveis, os valores são muito baixos, no entanto, podem ser comparados e auxiliar no diagnóstico de animais com doenças respiratórias.(AU)

Electrophoretic analysis (sds-page) of canine urinary proteins according to the stage of chronic kidney disease / [Análise eletroforética (SDS-PAGE) de proteínas urinárias de cães de acordo com o estágio da doença renal crônica]

Glomerular proteinuria is characterized by the loss of high-molecular-weight proteins (HMWPs), while tubulointerstitial proteinuria is characterized by the loss of low-molecular-weight proteins (LMWPs). The objective was to assess the molecular weight of urinary proteins (MWUP) in dogs with naturally acquired CKD and determine the proportion of HMWPs and LMWPs according to CKD stage. Twenty-eight dogs with CKD were recruited and divided into 4 groups based on serum creatinine (Cr) levels (group1: Cr<1,4, n=8; group2: 1,45,0, n=5). The control group consisted of 5 healthy dogs. The MWUP was determined by SDS-PAGE. The urinary protein-to-creatinine ratio (UP/C) was used to quantitatively assess proteinuria. The electrophoresis pattern revealed a proportionally greater loss of HMWPthan of LMWP in all groups with CKD and an increased loss of LMWP in group 4 (P<0.05). These results suggest a predominance of glomerular injuries throughout all stages of CKD in these dogs and an increase in tubulointerstitial injury towards the end-stage of the disease. The results of the present study support the recommendation of SDS-PAGE as an effective technique for the qualitative assessment of proteinuria, as well as a method for assessing the severity and location of renal injury.(AU)

A proteinúria glomerular é caracterizada pela perda de proteínas de alto peso molecular (PAPM), enquanto a proteinúria tubulointersticial se caracteriza pela perda de proteínas de baixo peso molecular (PBPM). O objetivo do trabalho foi determinar o peso molecular das proteínas urinárias (PMPU) de cães com DRC naturalmente adquirida e a proporção de PAPM e PBPM de acordo com o estágio da DRC. Foram utilizados 28 cães com DRC, divididos em quatro grupos, de acordo com o nível sérico de creatinina (cr) (grupo 1: cr<1,4, n=8; grupo 2: 1,45,0, n=5). O grupo controle era composto por cinco cães saudáveis. O PMPU foi determinado por SDS-PAGE. A relação proteína:creatinina urinária (RPCU) foi utilizada como um método quantitativo de proteinúria. A eletroforese revelou uma perda proporcionalmente maior de PAPM, quando comparada às PBPM, em todos os grupos de DRC, bem como uma perda crescente de PBPM no grupo 4 (P<0,05). Esses resultados sugerem uma predominância de lesão glomerular em todos os estágios de DRC nesses cães e uma progressão crescente na lesão túbulo-intersticial no estágio terminal da doença. Os resultados deste estudo reafirmam a recomendação de que a eletroforese de proteínas urinárias é uma técnica qualitativa efetiva de avaliação da proteinúria, bem como um método que permite avaliar a extensão e a localização da lesão renal.(AU)

Modified comet assay with Giemsa staining: a suitable method for assessing genotoxicity in rats / Ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa: um método adequado para avaliar a genotoxicidade em ratos

The present study tested a comet assay that was modified for compatibility with Giemsa staining to assess the drug genotoxicity in the peripheral blood of rats. We analysed the peripheral blood of 16 female Wistar rats (N=8 rats/group) from a control group and from a group that was treated with an intraperitoneal injection of 50mg cyclophosphamide/kg. The comet assay was carried out with modifications of the blood volume and immersion time in the lysing solution and different combinations of electrophoresis conditions (running time, voltage and current), to Giemsa staining. The lysing time and electrophoresis conditions allowed for the expression of all classes of DNA damage during the electrophoresis run, and the comets were efficiently stained with Giemsa. The technique showed high reproducibility for the DNA classes. The results demonstrate that the modified comet assay with Giemsa staining can be standardized for routine laboratory procedures using a 20µL blood sample, 3h and 30min immersions in the lysing solution and electrophoresis runs with 23 to 25 V and 310 and 360mA of electrical current. The modified comet assay with Giemsa staining that was described in the present study was standardized to be applied in the laboratory routine.(AU)

O presente estudo testou um ensaio cometa modificado para a coloração de Giemsa para avaliar a genotoxicidade de fármacos no sangue periférico de ratos. Analisou-se o sangue periférico de 16 ratas Wistar (n=8 ratas/grupo) de um grupo controle e de um grupo que foi tratado com uma injeção intraperitoneal de 50mg/kg pv. de ciclofosfamida. O ensaio cometa foi realizado com modificações do volume sanguíneo e do tempo de imersão na solução de lise, bem como com diferentes combinações de condições de eletroforese (tempo de corrida, tensão e corrente), para coloração de Giemsa. O tempo de lise e as condições de eletroforese permitiram a expressão de todas as classes de danos no DNA durante a corrida de eletroforese, e os cometas foram eficientemente corados com Giemsa. A técnica mostrou alta reprodutibilidade para as classes de DNA. Os resultados demonstram que o ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa foi padronizado para procedimentos laboratoriais de rotina usando-se uma amostra de sangue de 20µL, 3h30min de imersão na solução de lise e eletroforese com 23 a 25 V e 310 e 360mA. O ensaio cometa modificado com coloração de Giemsa descrito foi padronizado para ser aplicado na rotina laboratorial.(AU)

Influence of different sources of contamination on the microbiological quality of lettuce in the Teresópolis region, RJ, Brazil / Influência de diferentes fontes de contaminação na qualidade microbiológica de alface na região de Teresópolis, RJ

ABSTRACT Irrigation water and cultivated soil have been identified as possible sources of contamination in several crops. In certain vegetables that are eaten raw, such as lettuce, this contamination can lead to public health problems. Aiming to evaluate the influence of these sources on the quality of lettuce grown in the Córrego Sujo Basin, Teresópolis, RJ, an important agricultural pole whose production services the metropolitan region of Rio de Janeiro, water from different sources (spring, weir and river) was collected in this region, as well as samples of soil and lettuce irrigated with these waters, to carry out conventional microbiological analyzes (counts of total heterotrophic bacteria and thermotolerant coliforms) and molecular analyzes (PCR-DGGE). The count of fecal coliforms in lettuce suggests that there is an influence of irrigation water and the cultivated soil on the contamination of these vegetables. The grouping of bacterial communities in the different samples obtained by the PCR-DGGE technique shows that irrigation water has a greater influence on the contamination of these vegetables in relation to the soil where they are grown. These results corroborate the need to monitor water bodies used for irrigation and demonstrate that the PCR-DGGE technique is of great value for the study of microbial communities and, when associated with specific primers, can help in the detection of pathogens in food.

RESUMO A água de irrigação e o solo de cultivo têm sido apontados como possíveis fontes de contaminação em diversas culturas. Em determinadas hortaliças consumidas cruas, como a alface, essa contaminação pode causar problemas de saúde pública. Objetivando avaliar a influência dessas fontes na qualidade das alfaces cultivadas na Bacia do Córrego Sujo, Teresópolis, RJ; importante polo agrícola com produção voltada à região metropolitana do Rio de Janeiro, coletou-se nesta região águas proveniente de diferentes fontes (nascente, açude e rio); solos e alfaces irrigados com essas águas, para realização de análises microbiológicas convencionais (contagens de bactérias heterotróficas totais e coliformes termotolerantes) e moleculares (PCR-DGGE). A contagem de coliformes fecais na alface sugere que existe influência da água de irrigação e do solo na contaminação desses vegetais. O agrupamento das comunidades bacterianas nas diferentes amostras obtido pela técnica de PCR-DGGE mostra que a água de irrigação tem influência maior na contaminação dessas hortaliças em relação ao solo onde são cultivadas. Esses resultados corroboram a necessidade de monitoramento de corpos d'água utilizados para irrigação e demonstram ser a técnica do PCR-DGGE de grande valia para o estudo das comunidades microbianas e, quando associada a iniciadores específicos podem ajudar na detecção de patógenos em alimentos.

Condiciones para el análisis de proteínas del micelio de Lentinuia edodes obtenido por fermentación en estado líquido / Conditions for protein analysis of Lentinuia edodes mycelium obtained from liquid state fermentation / Condições para a análise de proteínas do micélio de Lentinuia edodes obtidas por fermentação em estado líquido

Resumen Pocos son los trabajos enfocados en la producción biotecnológica y el desarrollo de herramientas analíticas en torno a la Lentinuia edodes, seta comestible con potencial para el desarrollo de nutracéuticos. Por esto, en esta investigación, se estudió la producción de biomasa del hongo en el tiempo, mediante fermentación en estado líquido, y se seleccionaron las condiciones que permitieron la obtención de extractos para la aplicación de herramientas para análisis proteómico. Los métodos de extracción de proteínas, ácido tricloroacético (TCA) - acetona y TCA - acetona - fenol, fueron comparados en términos del rendimiento de extracción y los perfiles de separación usando electroforesis en 1D (SDS-PAGE) y 2D (IEF-SDS PAGE). Se determinó que a los 10 días de crecimiento se obtiene la mayor producción de biomasa y proteína total. La extracción con TCA - acetona - fenol presentó un mayor rendimiento, resolución y número de bandas en la electroforesis 1D. En 2DE, los dos métodos permitieron la extracción de proteínas con puntos isoeléctricos en el rango de pH 3-10, pero el método TCA - acetona - fenol conllevó a una extracción diferencial, favoreciendo el rango de masa de 33 a 113 kDa. Estos resultados se constituyen en una primera aplicación de técnicas de separación electroforética para futuros estudios proteómicos.

Abstract Few are the investigations focused on the biotechnological production and the development of analytical tools about Lentinuia edodes, an edible mushroom which has a potential for being used in the development of nutraceutical products. For this reason, in this research, the production of biomass of the mushroom over time by liquid state fermentation (LSF) was studied. Then, the conditions that allow obtaining protein extracts for the application of tools for proteomic analysis were selected. Trichloroacetic acid (TCA) - acetone and TCA - acetone - phenol were the two protein extraction methods which were compared in terms of extraction yield and separation profiles in 1D (SDS-PAGE) and 2D (IEF-SDS PAGE) electrophoresis. The highest production of biomass and total protein content was obtained after 10 days of LSF. Protein extraction with TCA - acetone -phenol presented the highest yield, resolution and number of bands in 1D electrophoresis. In 2DE the two methods allowed the extraction of proteins with isoelectric points in pH 3-10 range but, the TCA - acetone - phenol method favored a differential extraction of proteins in the range of 33 to 113 kDa. These results constitute a first application of electrophoretic separation techniques for future proteomic studies.

Resumo Lentinuia edodes é um cogumelo comestível com potencial para o desenvolvimento de nutracêuticos. Entretanto, os trabalhos voltados para a produção biotecnológica e o desenvolvimento de ferramentas analíticas que permitem aprofundar sua composição são incipientes. Nesta pesquisa, a produção de biomassa do fungo ao longo do tempo por meio de fermentação no estado líquido foi estudada e as condições que permitem obter extratos para a aplicação de ferramentas para análise proteômica foram selecionadas. Os métodos de extração de proteínas usados foram ácido tricloroacético (TCA) - acetona e TCA - acetona - fenol e comparada em termos de rendimento de extracção e perfis de separação utilizando electroforese 1D (SDS-PAGE) e 2D (IEF-SDS PAGE). Foi determinado que após 10 dias de crescimento, a maior produção de biomassa e proteína total foi obtida. A extração com TCA - acetona - fenol apresentou maior rendimento, maior resolução e número de bandas em eletroforese 1D. No 2DE os dois métodos permitiram a extração de proteínas com pontos isoelétricos na faixa de pH 3-10, mas o método TCA - acetona - fenol levou a uma extração diferencial, favorecendo a faixa de 33 a 113 kDa. Estes resultados constituem uma primeira aplicação de técnicas de separação eletroforética para futuros estudos proteômicos.

Transferrina como marcador de maturação pulmonar em cordeiros nascidos a termo ou prematuros / Transferrin as a marker of pulmonary maturation in lambs born at term or premature

O objetivo do estudo foi procurar proteínas de fase aguda que possam indicar sinais de maturação no neonato prematuro, por meio da quantificação sérica delas. Identificou-se a imunoglobulina A, a ceruloplasmina, a haptoglobina, a glicoproteína ácida, a transferrina, a albumina e as imunoglobulinas G de cadeias leve e pesada, pela comparação do perfil dos proteinogramas de cordeiros nascidos a termo com os prematuros submetidos a diferentes protocolos terapêuticos, a fim de estimular a atividade respiratória. Constituíram-se seis grupos: PN (n= 9): nascidos de parto normal; CN (n= 7): nascidos de cesariana em tempo normal de gestação; CP (n= 6): nascidos de cesariana prematura sem nenhum tipo de tratamento; DEX (n= 9): prematuros cujas mães receberam dexametasona pré-parto; SURF (n= 6): prematuros tratados com surfactante; e DEXSURF (n= 6): prematuros tratados com surfactante cujas mães receberam dexametasona pré-parto. As avaliações foram realizadas nos momentos imediatamente após o nascimento (M0), após 24 (M24) e após 48 horas (M48). As amostras foram processadas por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). A albumina, as imunoglobulinas e a proteína total dos cordeiros tiveram elevação após a ingestão de colostro. Maiores valores séricos de transferrina são referentes a maior período gestacional, podendo essa proteína ser utilizada como marcador de maturação neonatal.(AU)

The aim of this study was to search for acute phase proteins that could indicate signs of maturation in the premature neonate by quantifying them in serum. Immunoglobulin A, ceruloplasmin, haptoglobin, acid glycoprotein, tranferrin, albumin, light and heavy chain immunoglobulin G were quantified, comparing the profile of proteinograms from term to preterm lambs submitted to different protocols that stimulate respiratory activity. Six groups were used: PN (n= 9): born from normal birth; CN (n= 7): born from caesarean section at normal time of gestation; CP (n= 6): born from premature cesarean without any type of treatment; DEX (n= 9) preterm whose mothers received prepartum dexamethasone; SURF (n= 6) preterm treated with surfactant; DEXSURF (n= 6): preterm treated with surfactant whose mothers received prepartum dexamethasone. The evaluations were performed immediately after birth (M 0), after 24 and 48 hours (M 24 and M 48). Samples were processed with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Albumin, immunoglobulins, and serum total protein of the lambs were elevated, after colostrum ingestion. Higher serum transferrin values refer to a longer gestational period, and this protein may be used as a marker of neonatal maturation.(AU)

Relação do proteinograma sérico e as fases folicular e luteal do ciclo estral em éguas / Relation of the serum proteins and the follicular and luteal phasesof the estrous cycle in mares

O objetivo deste estudo foi obter o perfil eletroforético das proteínas séricas em éguas cíclicas e verificar as diferenças entre as fases folicular e luteal do ciclo estral nesta espécie. Foram utilizadas 18 éguas, totalizando 36 amostras de soro, sendo duas de cada égua. As amostras foram colhidas no estro e no diestro. As proteínas séricas totais foram obtidas pelo método do Biureto, a partir da utilização de Kits comerciais (LABTEST®) e, as diferentes subfrações proteicas, por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). O eletroforetograma das proteínas séricas colocou em evidência a presença de 17 a 25 frações proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 22 a 254 kDa. Identificaram-se duas proteínas ainda não nomeadas oficialmente, de massas moleculares (MM) 23 kDa e 144 kDa. Os valores médios ± SEM obtidos para cada variável no estro e no diestro, respectivamente, foram: proteínas totais (g/dL) 7,11 ± 0,07 e 7,36 ± 0,07; albumina (mg/dL) 4790,83 ± 69,10 e 5027,19 ± 69,10; α1 glicoproteína ácida (mg/dL) 4,90 ± 0,31 e 4,93 ± 0,31; ceruloplasmina (mg/dL) 15,28 ± 1,31 e 10,65 ± 1,31; haptoglobina (mg/dL) 22,70 ± 1,16 e 27,06 ± 1,16; transferrina (mg/dL) 329,00 ± 9,78 e 350,16 ± 9,78; IgA (mg/dL) 119,91 ± 6,30 e 107,03 ± 6,30; IgG (mg/dL) 1525,07 ± 40,18 e 1517,25 ± 40,18; MM 23 (mg/dL) 204,44 ± 8,61 e 219,79 ± 8,61; MM 144 (mg/dL) 22,13 ± 0,55 e 21,49 ± 0,55. Não houve diferença significativa das proteínas totais e suas frações do estro para o diestro. Conclui-se que as modificações hormonais durante as fases do ciclo estral da égua não interferem no proteinograma sérico.

This study aimed to obtain the electrophoretic profile of serum proteins in cyclic mares and to verify the differences between the follicular and luteal phases of the estrous cycle in this species. Eighteen mares were used, totaling 36 serum samples, two of each mare. Samples were collected both in estrus and in diestrus. Total serum proteins were obtained by the Biureto method, by using commercial kits (LABTEST®), while the different protein subfractions by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The electroforetogram of serum proteins evidenced the presence of 17 to 25 protein fractions, whose molecular weights ranged from 22 to 254 kDa. Two proteins that were not yet officially named were identified, of molecular weights (MW) of 23 kDa and 144 kDa. The mean values (± SEM) obtained for each variable in estrus and diestrus were, respectively: total proteins (g/dL) 7.11 ± 0.07 and 7.36 ± 0.07; albumin (mg/dL) 4790.83 ± 69.10 and 5027.19 ± 69.10; α1 acid glycoprotein (mg/dL) 4.90 ± 0.31 and 4.93 ± 0.31; ceruloplasmine (mg/dL) 15.28 ± 1.31 and 10.65 ± 1.31; haptoglobine (mg/dL) 22.70 ± 1.16 and 27.06 ± 1.16; transferrin (mg/ dL) 329.00 ± 9.78 and 350.16 ± 9.78; IgA (mg/dL) 119.91 ± 6.30 and 107.03 ± 6.30; IgG (mg/dL) 1525.07 ± 40.18 and 1517.25 ± 40.18; MW 23 (mg/dL) 204.44 ± 8.61 and 219.79 ± 8.61; MW 144 (mg/dL) 22.13 ± 0.55 and 21.49 ± 0.55. No significant difference was verified in total proteins and its fractions in estrus and diestrus. The hormonal changes during the specific stages of the estrous cycle of the mare do not interfere with the serum proteinogram.

Relação do proteinograma sérico e as fases folicular e luteal do ciclo estral em éguas / Relation of the serum proteins and the follicular and luteal phases of the estrous cycle in mares

O objetivo deste estudo foi obter o perfil eletroforético das proteínas séricas em éguas cíclicas e verificar as diferenças entre as fases folicular e luteal do ciclo estral nesta espécie. Foram utilizadas 18 éguas, totalizando 36 amostras de soro, sendo duas de cada égua. As amostras foram colhidas no estro e no diestro. As proteínas séricas totais foram obtidas pelo método do Biureto, a partir da utilização de Kits comerciais (LABTEST) e, as diferentes subfrações proteicas, por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). O eletroforetograma das proteínas séricas colocou em evidência a presença de 17 a 25 frações proteicas, cujos pesos moleculares variaram de 22 a 254 kDa. Identificaram-se duas proteínas ainda não nomeadas oficialmente, de massas moleculares (MM) 23 kDa e 144 kDa. Os valores médios ± SEM obtidos para cada variável no estro e no diestro, respectivamente, foram: proteínas totais (g/dL) 7,11 ± 0,07 e 7,36 ± 0,07; albumina (mg/dL) 4790,83 ± 69,10 e 5027,19 ± 69,10; α1 glicoproteína ácida (mg/dL) 4,90 ± 0,31 e 4,93 ± 0,31; ceruloplasmina (mg/dL) 15,28 ± 1,31 e 10,65 ± 1,31; haptoglobina (mg/dL) 22,70 ± 1,16 e 27,06 ± 1,16; transferrina (mg/dL) 329,00 ± 9,78 e 350,16 ± 9,78; IgA (mg/dL) 119,91 ± 6,30 e 107,03 ± 6,30; IgG (mg/dL) 1525,07 ± 40,18 e 1517,25 ± 40,18; MM 23 (mg/dL) 204,44 ± 8,61 e 219,79 ± 8,61; MM 144 (mg/dL) 22,13 ± 0,55 e 21,49 ± 0,55. Não houve diferença significativa das proteínas totais e suas frações do estro para o diestro. Conclui-se que as modificações hormonais durante as fases do ciclo estral da égua não interferem no proteinograma sérico.

This study aimed to obtain the electrophoretic profile of serum proteins in cyclic mares and to verify the differences between the follicular and luteal phases of the estrous cycle in this species. Eighteen mares were used, totaling 36 serum samples, two of each mare. Samples were collected both in estrus and in diestrus. Total serum proteins were obtained by the Biureto method, by using commercial kits (LABTEST), while the different protein subfractions by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The electroforetogram of serum proteins evidenced the presence of 17 to 25 protein fractions, whose molecular weights ranged from 22 to 254 kDa. Two proteins that were not yet officially named were identified, of molecular weights (MW) of 23 kDa and 144 kDa. The mean values (± SEM) obtained for each variable in estrus and diestrus were, respectively: total proteins (g/dL) 7.11 ± 0.07 and 7.36 ± 0.07; albumin (mg/dL) 4790.83 ± 69.10 and 5027.19 ± 69.10; α1 acid glycoprotein (mg/dL) 4.90 ± 0.31 and 4.93 ± 0.31; ceruloplasmine (mg/dL) 15.28 ± 1.31 and 10.65 ± 1.31; haptoglobine (mg/dL) 22.70 ± 1.16 and 27.06 ± 1.16; transferrin (mg/dL) 329.00 ± 9.78 and 350.16 ± 9.78; IgA (mg/dL) 119.91 ± 6.30 and 107.03 ± 6.30; IgG (mg/dL) 1525.07 ± 40.18 and 1517.25 ± 40.18; MW 23 (mg/dL) 204.44 ± 8.61 and 219.79 ± 8.61; MW 144 (mg/dL) 22.13 ± 0.55 and 21.49 ± 0.55. No significant difference was verified in total proteins and its fractions in estrus and diestrus. The hormonal changes during the specific stages of the estrous cycle of the mare do not interfere with the serum proteinogram.

Concentrations of acute-phase proteins and immunoglobulins in serum and synovial fluid in clinically healthy heifers and steers / Concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas no soro e no líquido sinovial de bovinos clinicamente saudáveis

The aim of the study was to determine the concentration pattern of intra-articular acute phase proteins (APPs) and immunoglobulins in healthy crossbred cattle. Synovial fluid (SF) samples were collected from the radiocarpal joint of 25 heifers and 25 steers. Concentrations of APPs were measured by SDS-PAGE. The results were submitted to analysis of variance using the SAS statistical program, and means were compared by the Student-Newman-Keuls test (P<0.05). Thirty-seven proteins with molecular weights ranging from 7 to 37kDa were identified in SF of all animals. Eight were nominally identified with immunoglobulin A (IgA) and G (IgG), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Ab), α1-antitripsin (AAT), α1-acid glycoprotein (AGP), and haptoglobin (Hp). The α1-antitripsin was only identified in the Sf of the heifers. The SF values of Cp, Hp, AGP and IgA were significantly higher in heifers than in steers. In sera, 34 proteins with molecular weights between 7 and 244kDa were identified in heifers and steers. Similar proteins were nominally identified in the sera, however the α1-antitrypsin was identified only in SF. The serum values Tf, AGP and IgG were significantly higher in heifers compared with steers. In conclusion, the physiological acute-phase proteins concentrations in synovial fluid of healthy ruminants can be useful in the interpretation of samples from animals with joint diseases. The SF electrophoretic profile of healthy ruminants differs depending on gender. Similar proteins were nominally identified in the sera, but only the SF of α1-antitrypsin.(AU)

O objetivo do estudo foi determinar o padrão de concentração de proteínas de fase aguda e de imunoglobulinas intra-articulares (APPs) em bovinos mestiços saudáveis. As amostras de fluido sinovial (SF) foram coletadas da articulação radiocárpica de 25 novilhas e 25 novilhos. As concentrações de APPs foram mensuradas por SDS-PAGE. Os resultados foram submetidos à análise de variância usando o programa estatístico SAS, e os meios foram comparados pelo teste Student-Newman-Keuls (P<0,05). Trinta e sete proteínas com pesos moleculares variando de 7 a 37kDa foram identificadas no SF de todos os animais. Oito foram nominalmente identificadas como imunoglobulina A (IgA) e G (IgG), ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Ab), a1-antitripsina (AAT), glicoproteína a1-ácido (AGP) e haptoglobina (Hp). A α1-antitripsina foi identificada apenas no SF das novilhas. Os valores de Cp, Hp, AGP e IgA no SF foram significativamente maiores em novilhas do que em novilhos. No soro, 34 proteínas com pesos moleculares entre 7 e 244kDa foram identificadas nas novilhas e novilhos. Proteínas similares foram identificadas nos soros, mas apenas o SF das novilhas apresentou a α1-antitripsina. Os valores séricos de Tf, AGP e IgG foram significativamente maiores em novilhas em relação aos novilhos. Conclui-se que a mensuração das concentrações das proteínas da fase aguda no líquido sinovial de animais saudáveis pode ser útil na avaliação de amostras oriundas de bovinos com afecções articulares. O perfil eletroforético do SF de ruminantes saudáveis difere em função do gênero e as diferenças devem ser levadas em consideração na interpretação dos achados.(AU)

Estudio proteómico 2DE-DIGE en plasma sanguíneo de pacientes en etapa infantil con leucemia linfoblástica aguda / 2DE-DIGE proteomic study in blood plasma of patients in childhood stage with acute lymphoblastic leukemia / Estudo proteômico 2DE-DIGE no plasma sanguíneo de pacientes em estágio infantil com leucemia linfoblástica aguda

Resumen En Colombia, durante la última década, la leucemia linfoblástica aguda (LLA) ha causado más del 40% de las muertes por cáncer en menores de edad. Entre los factores que influyen en estas cifras, el diagnóstico tardío es uno de los factores que más afecta el éxito del tratamiento. Por lo anterior, esta investigación se centró en el estudio del proteoma plasmático de niños colombianos diagnosticados con LLA tipo B, en comparación con controles en la búsqueda de proteínas que podrían ser clasificadas como biomarcadores de diagnóstico. En vista de los avances en las herramientas proteómicas y de espectrometría de masas y teniendo en cuenta que son una alternativa para abordar la complejidad molecular de enfermedades como el cáncer, se utilizó una aproximación proteómica basada en una separación por electroforesis bidimensional diferencial (2DE-DIGE) con posterior separación por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS) en tándem. Se encontraron ocho proteínas con expresión diferencial en plasma de pacientes con LLA-B, entre las cuales resaltan la Serotransferrina, la Alfa-1-antitripsina, la Haptoglobina, la Alfa-2-glicoproteína de zinc y el Complemento C3.

Abstract In Colombia, during the last decade, acute lymphoblastic leukemia (ALL) has caused more than 40% of cancer deaths in children. Among the factors that influence these figures, late diagnosis is one of the factors that affects the treatment success. Therefore, this research focused on the plasma proteome study of Colombian children diagnosed with B-cell ALL, as compared with healthy controls in the search of proteins that could be classified as diagnostic biomarkers. Now, in view of the advances in the proteomics and mass spectrometry tools and taking into account that they are an alternative to address the molecular complexity of diseases such as cancer, a proteomic approach, based on bidimensional difference gel electrophoretic separation (2DE-DIGE) coupled to LC-MS/ MS, was used. We found eight differentially expressed proteins in plasma from B-cell ALL patients as follows: Serotransferrin, Alpha-1-antitrypsin, Haptoglobin, Zinc-alpha-2-glycoprotein, and Complement C3.

Resumo Na Colômbia, durante a última década, a leucemia linfoblastica aguda (LLA) tem sido o câncer com maior incidência, com mais de 40% das mortes por câncer em menores atribuídas a essa doença. Entre os fatores que influenciam esses números, o diagnóstico tardio talvez seja o fator mais sensível que afeta negativamente o sucesso do tratamento. Esta pesquisa enfocou o estudo do proteoma plasmático de crianças colombianas diagnosticadas com LLA tipo B, dada a sua alta incidência, em comparação com controles na busca por proteínas que poderiam ter potencialidade para serem classificadas como biomarcadores diagnósticos. Agora, em vista dos avanços nas ferramentas de proteômica e espectrometria de massa e sabendo que eles são uma alternativa para abordar a complexidade molecular de doenças como o câncer, usamos uma abordagem proteômica baseada em uma separação por eletroforese bidimensional diferencial (2DE-DIGE) com subsequente separação por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem. Encontramos 8 proteínas com expressão diferencial no plasma de pacientes com LBA, dentre os quais a Serotransferrina, a Alfa-1-antitripsina, a Haptoglobina, a Glicoproteína alfa-2-zinco e o Complemento C3.

Development of analytical method for quantification of antineoplastic in drug delivery systems

Nos últimos anos têm crescido cada vez mais o número de pesquisas envolvendo nanotecnologia para obtenção de medicamentos com liberação controlada, pois esses sistemas podem: proteger o fármaco de incompatibilidades tanto biológicas quanto físico-químicas assim como controlar a biodisponibilidade do fármaco. Embora com todas essas vantagens não existem métodos in vitro realmente capazes de prever com precisão a liberação dos fármacos por esses sistemas, por esse motivo, é muito importante o desenvolvimento de métodos de liberação in vitro para determinar a cinética de liberação desses sistemas.O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar os métodos de eletroforese capilar (CE) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinar a eficiência de encapsulação do fármaco imatinibe em nanopartículaspreviamente elaboradas e caracterizadas, assim como estudar sua liberação in vitro por CE. As nanopartículas foramdesenvolvidas pelo método de nanoprecipitaçãoe caracterizadas quanto ao tamanho, potencial zeta, morfologia e eficiência de encapsulação. A eletroforese capilar é uma técnica alternativa muito promissora em relação ao HPLC devido ao seu baixo custo, menor tempo de corrida e menos poluente ao meio ambiente. Os métodos de quantificação por CE e HPLCforam desenvolvidose validadossegundo as diretrizes do ICH, Farmacopeia Americana e ANVISA, permitindo desenvolver um estudo de liberação.As nanoesferas desenvolvidas apresentaram diâmetro médio próximo a 150nm, com índice de polidispersão menor que 0,1 e aproximadamente 90% de eficiência de encapsulação. Ambos métodos se mostraram lineares com coeficientes de determinação superiores a 0,99, os métodos se mostraram precisos (%DPR< 2), exatos(101,0±4,2% e 98,0±2,5% para HPLC e CE, respectivamente)e seletivos.O método de CE permitiu desenvolver um método de estudo de liberação independente das membranas de diálise

In recent years, there has been a growing number of researches involving nanotechnology to obtain controlled release drugs, these systems can: protect the drug against biological and physico-chemical incompatibilities; controlling the bioavailability of the drug. Although with all these advantages there are no in vitro methods really capable of accurately predicting drugs release by such systems, therefore, the development of in vitro release methods to determine the release kinetics of such systems is very important. The objective of the present work was to develop and validate capillary electrophoresis (CE) and HPLC methods to determine the encapsulation efficiency of the imatinib drug in previously elaborated and characterized nanoparticles, as well as to study its release in vitro by CE method. The nanoparticles were synthesized using the nanoprecipitation method and characterized by size, zeta potential, morphology and encapsulation efficiency. Capillary electrophoresis is a very promising alternative to HPLC because of its low cost, less runtime and less polluting environment. The CE and HPLC methodswere developed and validated according ICH, American Pharmacopoeia and ANVISA guidelines.Developed nanospheres had an average diameter close to 150nm, with polydispersity index less than 0.1 and approximately 90% encapsulation efficiency. Both methods were linear with determination coefficients higher than 0.99, the methods were precise (%RSD < 2), accurate (101.0±4,2% and 98.0±2,5% for HPLC and CE, respectively) and selective. Capillary electrophoresis method allowed to develop a drug release study independent of dialysis membranes

Proteinograma e concentração sérica de IgG em potros, do nascimento aos trinta dias de vida, tratados com plasma / Proteinogram and serum IgG concentration in newborn foals up to thirty days of life treated with plasma

Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma e concentrações séricas de IgG (após a padronização de teste ELISA) em potros do nascimento aos trinta dias de idade, antes e depois de mamarem colostro e serem tratados com plasma por via intravenosa. Foram utilizados 20 potros e suas respectivas mães, além de quatro animais doadores de plasma. Foram colhidas amostras de sangue dos potros em cinco momentos, logo após o nascimento e antes de mamar colostro (M1), dez horas após nascimento (M2), 24 horas após nascimento e previamente administração do plasma sanguíneo (M3), 48 horas de vida e 24 horas após administração do plasma sanguíneo (M4), e 30 dias após nascimento (M5). Foram colhidos sangue e colostro das éguas progenitoras no momento do parto. A concentração de proteína total (PT) e albumina foram determinadas em analisador bioquímico, a concentração de PT também foi avaliada em refratômetro manual. O fracionamento proteico foi realizado utilizando eletroforese em gel de agarose. A densidade do colostro foi avaliada com colostrômetros de refração BRIX e de densidade específica. A concentração de IgG total de todas as amostras foi determinada por teste ELISA. Com o sistema de ELISA aqui proposto foi possível determinar concentrações de IgG em amostras de soro, plasma e colostro equino com adequada repetibilidade. A média ± desvio padrão da concentração sérica de IgG dos potros ao nascer, foi de 15±8mg/dL, com dez horas de vida foi de 2.408±608mg/dL, se manteve em níveis semelhantes até 48 horas (2.364±784mg/dL) e diminuíram significativamente aos 30 dias de vida (1.414±586mg/dL). A concentração sérica e colostral de IgG nas éguas foi de 1.746±505mg/dL e 7.714±2.619mg/dL, respectivamente. A concentração plasmática de IgG dos doadores de plasma foi de 2.026±148mg/dL. Houve correlação positiva entre as concentrações séricas de IgG e PT (r=0,69 para refratômetro e r=0,76 para bioquímico), GT (r=0,81) e gamaglobulina (r=0,85). Dez horas após o nascimento foi possível verificar a transferência de imunidade passiva, possibilitando adotar medidas profiláticas e/ou terapêuticas em haras de criação de cavalos. Considerando que a proteína total, globulinas totais e fração γ-globulina apresentam correlação com IgG, estas determinações são úteis para monitorar os potros após mamarem o colostro. Um litro de plasma administrado às 24 horas de vida não foi suficiente para aumentar as concentrações séricas de IgG, 24 horas após transfusão, em potros com adequada transferência de imunidade passiva.(AU)

The aim of this study was to evaluate serum protein and serum IgG concentrations (after a direct enzyme immunoassay test ELISA optimization) in newborns foals from birth to thirty days of life before and after colostrum consumption and intravenous treatment with plasma. Twenty foals and their respective progenitors as well as four plasma donor's horses were used. Blood samples were obtained from newborn foals at five time points, immediately after birth and before colostrum intake (M1), ten hours after birth (M2), 24 hours after birth and prior administration of blood plasma (M3), 48 hours after birth and 24 hours after plasma administration (M4), and 30 days after birth (M5). Blood and colostrum samples were collected from the progenitor mares immediately postpartum. Concentration of total protein (TP) and albumin were determined using a biochemical analyzer. The TP concentration was also measured by refractometer. Fractions of total serum protein were separated using agarose gel electrophoresis. Colostrum density was evaluated using BRIX refractometer and specific density colostrometer. Total IgG concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay. With the ELISA system proposed here it was possible to determine IgG concentrations in serum, plasma, and equine colostrum samples with adequate repeatability. Serum IgG concentration in foals at birth was 15±8mg/dL (mean ± standard deviation) raising at ten hours (2,408±608mg/dL) and remaining at similar levels up to 48 hours of life (2,364±784mg/dL), and decreasing significantly at 30 days of age (1,414±586mg/dL). Serum and colostrum IgG concentrations of mares were 1,746±505mg/dL and 7,714±2,619mg/dL, respectively. The plasma IgG concentrations from donor mares were 2,026±148mg/dL. Total protein, total globulins, and γ-globulin fraction showed correlation with IgG. Ten hours post birth was an adequate time to verify the transfer of passive immunity, allowing to adoption prophylactic and/or therapeutic measures in a horse farms. One liter of plasma administered at 24 hours of life was not sufficient to raise serum IgG concentrations in foals without passive immunity transfer failure.(AU)